תוֹכֶן
שחפת הינה מחלה זיהומית הנגרמת על ידי החיידק Mycobacterium tuberculosis והיא מחלה נשימתית המאופיינת בתצורות פקעת, נמק, מורסות, פיברוזיס והסתיידות בריאות. זה יכול גם להדביק את הכליות, בלוטות הלימפה, העצמות, המפרקים והעור.
אבחון המעבדה העיקרי של בזילוס זה כולל צביעה כדי להמחיש את החיידקים תחת המיקרוסקופ. המדגם הנבחר הוא שטיפה בכיח או ברונכואלבולרית לזיהוי זיהום בדרכי הנשימה או דגימה של רקמה ממשית.
פִיסִיוֹלוֹגִיָה
שחפת של מיקובקטריום היא אורגניזם בצורת מוט (bacilli), נבג שאינו נייד ולא חובה. אורך חיידק זה הוא 0.4x3 מיקרומטר ועובר ביקוע בינארי (חלוקה של תא הרבייה) כל 15 עד 24 שעות, הנחשב לאיטי בהשוואה לחיידקים אחרים. מסיבה זו, יכול להימשך עד תשעה שבועות למיקרובקטריום להופיע במדיום התרבות.
אורגניזם זה רגיש לאור UV ולחום (כגון פסטור), אך מתנגד לחיטוי כימי.
צביעת גראם
Mycobacterium tuberculosis לא באמת יכול להיות מסווג כגרם חיובי או גרם שלילי. סיווג זה נעשה על סמך כמות הפפטידוגליקן בדופן התא של חיידק. למין חיובי גרם יש שכבה עבה של מולקולה זו (כ 90%), ואילו למין שלילי יש שכבה דקה (מ 5% ל 20%). כתמי גרם חודרים לדופן התא ומתקשרים לרכיבים הכימיים שבתוכו. תחת המיקרוסקופ, החיידקים המוכתמים יהפכו לסגולים או ורודים.
בשחפת מיקובקטריום, דופן התא מורכב מפפטידוגליקן, אך גם משומנים מורכבים המעכבים חדירת צבע גרם. דופן התא מתנגד גם לשינוי צבע על ידי חומצה או אלכוהול, ולכן מיקובקטריום מכונה "עמיד בפני חומצה". שומנים בדופן התא הם חומצה מיקולית, גורם מחרוזת ושעוות D. אם היו מוכתמים החיידקים, התאים היו נראים חיוביים בגרם או מעט חיוורים עם מעט מאוד צבע.
כדי לראות את החיידקים, יש להשתמש בכתמים מיוחדים, כגון Aumarine או Zhiel-Neelson כתם.
כתם Aumarine-Rhodamine
התהליך באמצעות אוראמין-רודמין משתמש בצבע פלואורסצנטי צהוב כדי להמחיש את שחפת המיקרובקטריום תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי. אשלגן פרמנגנט או תפוז אקרידין יכולים לשמש כצבע ניגודיות. מתחת לעדשה תאי החיידק יראו ירוקים.
צבע האוראמין-רודמין רגיש יותר מזיאל-נלסון ומשתלם יותר מבחינה כלכלית.
צביעת זיהל-נלסון
הכתם של זיהל-נלסון נוצר על ידי המדענים פרנץ זיהל ופרידריך נילסן, ומשתמש בקרבול-פוקסין מחומם, ריכוז גבוה של חומצה-אלכוהול וצבע ניגודיות, כמו מלכיט ירוק או כחול מתילן. תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי, תאי החיידק יופיעו בוורוד עז.
צבע Ziehl-Neelson הוא סטנדרט המצוינות לזיהוי ראשוני של שחפת מיקובקטריום ומיקרובקטריום שדון.
אגר
משנית לזיהוי המיקרוסקופיה, יש לגדל את mycobacterium tuberculosis על תרבית אגר מיוחדת. בג'לטין של Lowenstein-Jensen חומרים אורגניים מורכבים (כגון ביצים ותפוחי אדמה), מלחים, גליצרול וירוק מלכיט (המעכב חיידקים אחרים). ניתן להוסיף אנטיביוטיקה כדי לעכב עוד יותר מיקרואורגניזמים מזהמים. הדגימה מונחת על אגר זה, והחיידקים גדלים תוך שלושה עד תשעה שבועות.
ניתן להשתמש בתמיסה של תרבית תזונה, כגון אלבומין וביוטין, כדי לתמוך בצמיחתם אפילו בכמות הקטנה ביותר של חיידקי המטרה. זה ידוע בשם Middlebrook 7H9 (או 7H12).
בשני המדיה המושבות יופיעו כמושבות קטנות, מלוטשות, חומות בהירות.
בעזרת טכנולוגיה מתקדמת ניתן כעת לגדל את mycobacterium tuberculosis באמצעות קורא אוטומטי. תמיסה נוזלית של מדיום ברוק 7H9 ותרכובת מחוון פלואורסצנטי משמשת לניטור הצמיחה ולדיווח על זיהום חיובי או שלילי.